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细胞免疫化学:免疫酶标技术

更新时间:2013-01-22 09:33:07点击次数:2636次字号:T|T
1) 直接法 1.标本固定。 2.PBS 洗涤 2×3 分钟。 3.1% H2O2(或 1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温 10~20 分钟。 4.正常血清(1:10)孵育,室温 20 分钟。 5.滴加酶标记的抗体 37℃1 小时或 4℃过夜。 6.PBS 洗涤 3×3 分钟。 7.DAB+H2O2显色 5~10 分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前 15 分钟配制。 8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。 2) 间接法 1.标本固定。 2.P...
1) 直接法
1.标本固定。
2.PBS 洗涤 2×3 分钟。
3.1% H2O2(或 1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温 10~20 分钟。
4.正常血清(1:10)孵育,室温 20 分钟。
5.滴加酶标记的抗体 37℃1 小时或 4℃过夜。
6.PBS 洗涤 3×3 分钟。
7.DAB+H2O2显色 5~10 分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前 15 分钟配制。
8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
2) 间接法
1.标本固定。
2.PBS 洗涤 2×3 分钟。
3.1%H2O2(或 1%H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温 10~20 分钟。
4.正常血清(1:10)孵育,室温 20 分钟。
5.滴加第一抗体,37℃1 小时或 4℃过夜。
6.PBS 洗涤 3×3 分钟。
7.滴加酶标二抗,室温 1 小时。
8.PBS 洗涤 3×3 分钟。
9.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色 5~10 分钟。
10. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
3) 法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)
1.标定固定后,PBS 洗涤。
2.1%H2O2(或 1%H2O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温 10~20 分钟。
3.PBS 洗涤 2×3 分钟。
4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温 20 分钟。
5.滴加一抗,室温 1 小时或 4℃过夜。
6.PBS 洗涤 3×3 分钟。
7.滴加二抗,室温 30 分钟。
8.PBS 洗涤 3×3 分钟。
9.加 PAP 复合物,室温 60 分钟。
10. PBS 洗涤 3×3 分钟。
11. 0.04%DAB+0.03% H2O2显色 5~10 分钟。
12. 充分水洗。13. 苏木精复染,封片观察。
4) 双 法
1~10 同单 PAP 法。
11. 二次加酶标二抗。
12. PBS 洗。
13. 二次加 PAP。
14. PBS 洗。
15. 0.04%DAB+0.03 %H2O2显色 5~10 分钟。
16. 苏木精复染核,封片,镜检。
3) 法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)
1~8 同 PAP 法
5)加 ABC 液,室温 60 分钟。
10) PBS 洗。
11) 0.04%DAB+0.03% H2O2显色 5~10 分钟。
12) 充分水洗。
13) 苏木精复染核,封片,镜检。

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