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gene bridges快速简易条件式敲除工具包 - loxP

更新时间:2013-03-28 09:29:44点击次数:3469次字号:T|T
快速简易条件式敲除工具包 - loxP 用于将loxP位点快速、方便地融入任意目标位置的大型载体质粒(产生转基因小鼠基因模型) 手册[PDF]      联系技术支持            订单       序列 应用   &nb

快速简易条件式敲除工具包 - loxP

用于将loxP位点快速、方便地融入任意目标位置的大型载体质粒(产生转基因小鼠基因模型)

手册[PDF]      联系技术支持            订单       序列

应用

          本工具包用于在2-4周内将loxP位点融入任意目标位置的载体质粒,无需使用限制性酶

产生基于loxP位点的条件式敲除构筑

1.含目的基因的克隆
使用BAC亚克隆工具包,通过Red/ET重组将目的基因(橙色)从BAC中亚克隆至极小载体。

2. Red/ET重组

要插入单个loxP位点,在目标位置利用Red/ET重组及快速简易条件式敲除工具包loxP,引入一个loxP-PGK-gb2-neo-loxP盒(含通过PCR扩增添加的50bp同源臂)。

3. Cre介导切除
Cre
介导切除留下单个loxP位点。(另见“loxP选择盒”及“Cre表达质粒及菌株”)。

4. Red/ET重组
在目标位置通过Red/ET重组,使用快速简易条件式敲除工具包loxP,引入另一个含通过PCR扩增添加的50bp同源臂的loxP-PGK-gb2-neo-loxP盒,产生所需打靶载体。

说明

内含loxP-PGK-gb2-neo-loxP盒可实现原核及真核细胞中的新霉素/卡那霉素选择。它结合了一个用于大肠杆菌中卡那霉素抗性表达的原核启动子(gb2)和一个用于哺乳动物细胞中新霉素抗性表达的真核启动子(PGK)。内含706-Cre表达质粒可实现大肠杆菌中的Cre重组。本工具包也可以用于操作细菌人造染色体。Red/ET效率高,重组完成后,Red/ET重组蛋白表达质粒pRedET易于消除。

目录

          Red/ET重组蛋白表达质粒pRedET。通过该质粒转化,任意大肠杆菌株都可作为Red/ET专用。

          用于您自己实验的loxP-PGK-gb2-neo-loxP模板

          阳性对照,在18kb高拷贝质粒中引入loxP位点

          详细操作指南,质粒、遗传图、序列的说明

           

序列

loxP-PGK-gb2-neo-loxP

loxP-PGK-gb2-neo-loxP


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