400-655-1678
快速简易大肠杆菌基因敲除工具包
用于大肠杆菌染色体上基因的快速敲除或改造
手册[PDF] 联系技术支持 订单 序列
特点
准确Red/ET重组
快速、精确
可以多次敲除
重组质粒易于消除
应用
本工具包用于在一周内敲除或改造大肠杆菌染色体上的基因。
大肠杆菌染色体上的基因靶向断裂
1.转化
待改造大肠杆菌株被表达质粒pRedET转化。
2. Red/ET重组
Red/ET表达通过添加阿拉伯糖和温度变化而诱发。包含50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被转化。Red/ET介导重组通过插入盒，破坏目标基因座。
3. 可选：消除筛选标记
Flp介导切除，留下单个FRT点。（另见“FRT选择标记盒”与“Flp表达质粒及菌株）
说明
Red/ET重组可以促成遗传信息以精确、明确、可靠的碱基对方式交换。FRT侧卡那霉素抗性标记盒可以使用工具包替换大肠杆菌染色体上的基因。Red/ET重组可以替换大肠杆菌染色体上30kb的片段。
使用FRT侧卡那霉素抗性盒对目标基因进行替换，在必要的情况下，可以利用FLP重组酶促成随后对选择标记的消除。FLP表达质粒可以从基因桥公司购得。
多次敲除可以通过重复插入工具包提供的功能盒或基因桥公司提供的其他功能盒完成。
由于pRedET 表达质粒的优化设计，重组过程是严格控制的。重组蛋白的基因受控于诱导型启动子，质粒携带温度敏感型复制起点，方便重组后的质粒消除。
目录
两个Red/ET重组蛋白表达质粒pRedET(tet)和pRedET(amp)。所有大肠杆菌株都可以利用这些质粒转化进行Red/ET重组。
FRT侧卡那霉素抗性模板（FRT-PGK-gb2-neo-FRT）可用于您自己的实验。
阳性对照可以替换大肠杆菌染色体上转运蛋白（manX）的基因。
详细操作指南，质粒、遗传图、序列的说明。
序列
FRT-PGK-gb2-neo-FRT
FRT-PGK-gb2-neo-FRT
